实验材料：
基础培养基（液体或干粉） PET/PETG方形试剂瓶[NEST]
血清（常规为FBS/NBS） 补充剂
移液枪 电动移液枪
15mL、50mL无菌离心管[NEST] 灭菌超纯水
盒装无菌吸头[NEST] 血清移液管[NEST]
超净工作台 双抗（青链霉素混合液）
杯式滤器(0.22μm PES膜) [NEST] 针式滤器 (0.22μm PES膜) [NEST]
实验准备：
血清准备：
配置培养基前一天，将所需血清从-20℃冰库取出，放置入4-23℃冰箱缓慢解冻储存，使用前37℃水浴加热。
培养基准备：
液体基础培养基使用前37℃水浴加热。
实验流程：
基础培养基配置（干粉）：
根据配置体积，选择合适的灭菌后容器，在容器中倒入约【yuē】90%体积的超纯水，将培养基干粉全部倒入该【gāi】容器中，用少量超纯水将袋内残留粉末洗出。
搅拌30min使所有成分完全溶解，待溶液澄清后，根据说明书加入适当量的碳酸氢钠（分析纯），继续搅拌5-10min至溶解，随【suí】后超纯水定容并调节PH值。(过滤会使【shǐ】培养基PH值稍微偏高，所以用【yòng】1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸溶液调整PH值至7.4-23.30）
使用0.22μm杯式滤器[NEST]或0.22μm针式滤器[NEST]过滤除菌【jun1】，并按照日常使用规格分装入PET/PETG方形试【shì】剂瓶[NEST]中，4-23℃条件下避光保存备用。【菌检合格后方可使用】
培养基配置：
若含有补充剂，用1000μL无菌吸头[NEST]取出适量预热完成的基础培养基，注入补充剂西林瓶中，将其充分溶解【jiě】，再【zài】将含有补充剂的培养基转移入基础培养基中。
接着按照血清使用比例，用血清移液管[NEST]吸取适量预热完成的血清，注入基础培养基中，盖上瓶盖充分混匀。
双抗加入：
除了特殊筛选系统外，一般正常培养状态下，培养基中不添加任何抗生素。若为防止细菌、真【zhēn】菌污染，或怀疑细胞污染需要清除细菌，可以加入青霉素-链霉素双抗溶液，其培养基中【zhōng】的终浓度为青霉素100U/ml，链霉素为100ug/ml。
培养基保存：
将配置后的完全培养基4-23℃条件下，避光保存备用；或按照使用需求分装入对应规格的PET/PETG方形试剂瓶[NEST]中。隔夜或4-23天后【hòu】监视完全培养基，溶液澄清通透且无染菌，方可使用。
使用多余的血清，按照剩余量，可分装入15mL/50mL的无菌离心管[NEST]中（防止血清冻存后膨胀泄露疑问，离心管工作体积建议为80%），亦可分装入合适规格的【de】PET/PETG方形试剂瓶[NEST]中，并用封口膜【mó】封口，-20℃条件下避光保存。
使用到的NEST产品：
15mL、50mL无菌离心管[NEST] PET/PETG方形试剂瓶[NEST]
杯式滤器(0.22μm PES膜) [NEST] 针式滤器 (0.22μm PES膜) [NEST]
